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發(fā)布時(shí)間:2019-12-14 閱讀281次
一、實(shí)驗(yàn)材料:葉綠素廠廢液、石油醚、層析用氧化鋁、丙酮、乙醇、環(huán)己烷。
二、實(shí)驗(yàn)器材:臺(tái)式離心機(jī)、離心管、天平、灰化爐、玻璃棒、玻璃層析柱、分液漏斗、紫外可見光分光光度計(jì)。
三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容:
1.廢液的預(yù)處理:取葉綠素廠廢液5mL于臺(tái)式離心機(jī)離心管中,置于臺(tái)式離心機(jī)中,進(jìn)行平衡操作后,1000 r/min離心15min。取上層黃色液體于50ml梨形分液漏斗中。加25ml石油醚(沸程為30一60℃),充分混勻。
2.氧化鋁層析柱的準(zhǔn)備:取100g氧化鋁于灰化爐中加熱至400℃,保持3h,使水分完全蒸發(fā)成活性氧化鋁。此時(shí)的氧化鋁為Ⅰ級(jí),適當(dāng)吸收空氣中的水分(約3%)后,成Ⅱ級(jí),然后,用石油醚將活性氧化鋁調(diào)制成糊狀,備用。另取1支20 mm×300 mm的玻璃層析柱,關(guān)閉閥門,加入三分之一體積的石油醚、再將糊狀的話性氧化鋁慢慢地加入到玻璃層析柱中,同時(shí)打開層析柱的閥門,讓中中的石油醚慢慢地流出,有利于氧化鋁的沉降。當(dāng)氧化鋁裝至層析柱的8D%時(shí),停止加氧化鋁,待氧化鋁完全沉降。
3.加樣層析和洗脫:裝好層析柱,同時(shí)打開層析柱的閥門和分液漏斗的閥門,使分液漏斗中的樣品慢慢地加入到氧化鋁層析柱中。觀察氧化鋁由于加入樣品后顏色的變化。當(dāng)前沿的顏色伸展至柱高度的二分之一時(shí),關(guān)閉分液漏斗和層析柱的閥門,停止加樣。另取1個(gè)250mL分液漏斗,內(nèi)裝石油醚:丙酮=9:l的混合溶液作為洗脫劑,安裝好層析裝置,分別打開分液漏斗和層析柱的閥門,讓洗脫劑慢慢流經(jīng)層析柱。當(dāng)顏色前沿到達(dá)層祈柱底部時(shí),注意觀察并記錄色帶的分離情況。第一條帶(從底部往上數(shù)),是α-胡蘿卜素,第二條帶是β-胡蘿卜素,第三條帶是γ—胡蘿卜素,再往上是其他類胡蘿卜素及其他色素。本實(shí)驗(yàn)要求收集β-胡蘿卜素組分。用50mL燒杯收集β-胡蘿卜素洗脫液。
4.沉淀:將洗脫液于50℃水浴中加熱使溶劑揮發(fā).然后,在殘留物中加氯仿使之溶解后再用乙醇沉淀,如發(fā)現(xiàn)有白色沉淀物質(zhì)產(chǎn)生,需用臺(tái)式離心機(jī),控制轉(zhuǎn)速在2000r/min狀態(tài)下進(jìn)行離心將其去除。在上清液中再加乙醇,得到的棕褐色沉淀,即為β-胡蘿卜素。稱量,記錄總重量。
關(guān)鍵詞:臺(tái)式離心機(jī)
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